【一、食品安全實(shí)驗(yàn)檢測(cè)背景與需求】

近年來(lái), 國(guó)家對(duì)食品安全監(jiān)管力度呈持續(xù)加強(qiáng)態(tài)勢(shì), 這般狀況下, 從農(nóng)田到餐桌整個(gè)流程的全鏈條檢測(cè)需求變得日益急切起來(lái)。依據(jù)《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品中獸藥殘留限度》（GB 31650 - 2019）以及《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品中真菌毒素限度》（GB 2761 - 2017）等具有強(qiáng)制性的標(biāo)準(zhǔn)里的要求規(guī)定, 各級(jí)的檢測(cè)機(jī)構(gòu)也好、食品加工企業(yè)也罷以及第三方實(shí)驗(yàn)室, 都得針對(duì)肉制品、乳制品、水產(chǎn)品、糧油等這些樣品之中的獸藥殘留、抗生素超標(biāo)的相關(guān)狀況、真菌毒素污染等項(xiàng)目開(kāi)展準(zhǔn)確的定量分析。傳統(tǒng)檢測(cè)方法有著操作繁雜、耗費(fèi)時(shí)間長(zhǎng)、靈敏度欠缺等情況, 特別是在面對(duì)數(shù)量眾多的樣本時(shí), 效率方面的限制格外突顯, 所以, 行業(yè)急切需要一種兼顧高精度一同高通量的的可檢測(cè)設(shè)備, 它既能夠符合國(guó)標(biāo)對(duì)于數(shù)據(jù)穩(wěn)定性的嚴(yán)苛要求, 又能夠讓操作流程變得簡(jiǎn)單, 減少對(duì)實(shí)驗(yàn)人員專(zhuān)業(yè)技能的依賴(lài), 酶標(biāo)儀作為酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法的關(guān)鍵儀器, 依靠其具備快速、靈敏、能夠批量處理的特性, 已然成為食品安全實(shí)驗(yàn)室的標(biāo)準(zhǔn)配置工具。

【二、實(shí)驗(yàn)所需儀器與試劑】

核心儀器：萊恩德LD-D96酶標(biāo)儀

本實(shí)驗(yàn)方案所推薦采用的是萊恩德LD - D96酶標(biāo)儀, 此儀器運(yùn)用的是8通道垂直光路設(shè)計(jì), 其波長(zhǎng)范圍將400 - 1000nm予以覆蓋, 能夠靈活實(shí)現(xiàn)多種常見(jiàn)檢測(cè)項(xiàng)目的適配, 它的讀數(shù)范圍達(dá)到了0 - 4.000Abs, 線性范圍為0 - 3.000Abs, 對(duì)于低濃度樣品的準(zhǔn)確捕捉能夠有效應(yīng)對(duì)。主要的優(yōu)勢(shì)之處在于, 其示值誤差小于或等于正負(fù)百分之零點(diǎn)零二Abs, 重復(fù)性的CV小于或等于百分之零點(diǎn)三, 如此能夠保證實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)具備很高的一致性以及重現(xiàn)性。儀器配備7寸彩色液晶觸摸屏, 有著全中文操作界面, 支持可視化布板, 可同時(shí)顯示整板測(cè)量信息, 配合專(zhuān)業(yè)酶標(biāo)儀軟件, 可存儲(chǔ)500組以上程序, 還可存儲(chǔ)10000個(gè)以上樣本, 并支持吸光度、線性方程、對(duì)數(shù)方程、樣條函數(shù)、抑止率等多種計(jì)算模式, 全部滿足獸藥殘留、真菌毒素、抗生素等項(xiàng)目的定量分析需求。再者, 該儀器具備支持3級(jí)振板速度進(jìn)行調(diào)節(jié)的功能, 同時(shí)還能夠設(shè)定0至255秒的振板時(shí)間, 如此一來(lái)可有效地削減氣泡所造成的干擾, 進(jìn)而提升檢測(cè)的準(zhǔn)確性。

配套試劑與耗材

用于酶聯(lián)免疫檢測(cè)的試劑盒, 需依據(jù)檢測(cè)項(xiàng)目來(lái)進(jìn)行選購(gòu), 比方像瘦肉精, 還有氯霉素, 以及黃曲霉毒素B1諸如此類(lèi)等等。

用于移液的器具以及與之配套的吸取頭部, 其量程范圍分別為零點(diǎn)五至十微升、一百至一千微升。

去離子水或超純水

一次性微孔板（96孔，高吸附型）

恒溫培養(yǎng)箱（37℃±1℃）

洗板機(jī)（可選，用于批量清洗微孔板）

計(jì)時(shí)器、離心管、試劑瓶等常規(guī)耗材

【三、標(biāo)準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)操作方法】

樣品前處理

依照檢測(cè)目標(biāo)物的差異, 依據(jù)相應(yīng)國(guó)標(biāo)方法來(lái)開(kāi)展樣品提取以及凈化。就拿肉類(lèi)中瘦肉精檢測(cè)來(lái)說(shuō), 取適量已粉碎的樣品, 添加提取液振蕩離心之后取出上清液, 經(jīng)由固相萃取柱進(jìn)行凈化, 收集洗脫液, 用氮?dú)獯蹈山又脧?fù)溶液定容。整個(gè)流程要在潔凈環(huán)境里操作, 防止交叉污染。處理后的樣品液要在2至8℃條件下保存, 24小時(shí)之內(nèi)完成檢測(cè)。

儀器準(zhǔn)備與設(shè)置

先檢查萊恩德LD-D96酶標(biāo)儀在開(kāi)機(jī)之前電源以及USB接口連接狀況是否正常, 接通電源之后 , 儀器會(huì)自己完成自檢以及調(diào)零 , 經(jīng)由觸摸屏進(jìn)入主菜單 , 挑選“新建程序”或者調(diào)用已有的模板 , 按照檢測(cè)項(xiàng)目去設(shè)置能檢測(cè)的波長(zhǎng) , 比如把450nm當(dāng)作主波長(zhǎng) , 將630nm用作參比波長(zhǎng) , 輸入樣本編號(hào) , 還有布板所采用的方式。像A1-H 12對(duì)應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)品和樣品所處的位置。可提議啟動(dòng)震晃板效果, 將震晃板速率設(shè)定成中等檔次數(shù)值區(qū)域, 震晃板延續(xù)時(shí)長(zhǎng)為十秒, 要保證反應(yīng)液體能夠均勻地混合起來(lái)。

實(shí)驗(yàn)操作步驟

領(lǐng)先步: 把酶標(biāo)板從試劑盒當(dāng)中取出來(lái)放置于室溫環(huán)境進(jìn)行平衡30分鐘。第二步: 依據(jù)布板圖逐個(gè)順序加入標(biāo)準(zhǔn)品、質(zhì)控品以及待測(cè)樣品, 每一個(gè)孔的加樣量平時(shí)一般是50μL或者100μL, 要格外留意更換吸頭以此來(lái)防止交叉污染的情況發(fā)生。第三步: 加入酶結(jié)合物或者抗體工作液, 輕輕地拍打板的側(cè)面使其混合均勻, 蓋上封板膜, 放置在37℃的恒溫培養(yǎng)箱里面進(jìn)行孵育30 - 60分鐘。第四步: 拿出酶標(biāo)板, 揭開(kāi)上面蓋著的封板膜, 倒掉孔里面的液體, 使用洗板機(jī)或者手動(dòng)方式洗板（每一個(gè)孔加入300μL洗滌液, 安靜放置30秒之后吸干, 反復(fù)進(jìn)行5次）。第五步: 往每一個(gè)孔內(nèi), 分別加入顯色液A五十微升, 以及顯色液B五十微升 , 在避免光線照射的情況下進(jìn)行顯色操作, 時(shí)長(zhǎng)設(shè)定為十五分鐘。第六步: 加入五十微升終止液, 輕輕地拍打使它們混合均勻, 緊接著放入萊恩德LD - D96酶標(biāo)儀當(dāng)中進(jìn)行測(cè)量。

數(shù)據(jù)采集與處理

于儀器軟件里挑選“終點(diǎn)法”模式了, 點(diǎn)擊“開(kāi)始測(cè)量”按鈕, 儀器就會(huì)在數(shù)秒之內(nèi)達(dá)成整板讀數(shù)操作。軟件會(huì)自行生成吸光度值, 并且依據(jù)預(yù)設(shè)的標(biāo)準(zhǔn)曲線來(lái)計(jì)算濃度。能夠把數(shù)據(jù)導(dǎo)出至U盤(pán)或者經(jīng)由USB連接電腦了, 借由配套的分析軟件開(kāi)展質(zhì)控評(píng)價(jià)以及報(bào)告生成工作。要是某孔的CV值超出預(yù)設(shè)閾值（比如3%）了, 系統(tǒng)就會(huì)標(biāo)記為異常, 給出復(fù)測(cè)提示。

【四、實(shí)驗(yàn)結(jié)論與方案優(yōu)勢(shì)】

此方案證實(shí)了萊恩德LD - D96酶標(biāo)儀于食品安全檢測(cè)里的可行性跟可靠性, 借助實(shí)際的對(duì)比測(cè)試, 該儀器針對(duì)多種獸藥殘留、真菌毒素標(biāo)準(zhǔn)品的檢測(cè)結(jié)果同理論值的偏差, 皆被調(diào)控在±5%以?xún)?nèi), 重復(fù)性CV值穩(wěn)固于0.3%以下, 全部符合國(guó)標(biāo)針對(duì)實(shí)驗(yàn)室數(shù)據(jù)精密度的要求。其核心優(yōu)勢(shì)在于, 高穩(wěn)定性光源, 也就是DC12V 22W進(jìn)口鹵素?zé)? 與電源管理系統(tǒng)相結(jié)合, 這能確保在連續(xù)測(cè)試8小時(shí)的情況下, 吸光度漂移不會(huì)超過(guò)±0.003Abs, 從而大幅降低因光源衰減而導(dǎo)致的誤判風(fēng)險(xiǎn)。與此同時(shí), 儀器內(nèi)置了自動(dòng)調(diào)零與自檢功能, 這使得非專(zhuān)業(yè)人員也能夠快速上手, 進(jìn)而減少培訓(xùn)成本。行業(yè)用戶(hù)的實(shí)際價(jià)值體現(xiàn)于, 單次實(shí)驗(yàn)?zāi)軌蛲瑫r(shí)處理可達(dá)96個(gè)樣本, 相較于傳統(tǒng)手工法效率提升超出6倍數(shù)目, 軟件支持自定義閾值與質(zhì)控規(guī)則達(dá)成檢測(cè)結(jié)果的快速判讀以及追溯, 整機(jī)具備免除維護(hù)設(shè)計(jì)致使使用壽命時(shí)間長(zhǎng), 降低開(kāi)展長(zhǎng)久運(yùn)維投入。縱觀來(lái)看, 萊恩德LD-D96酶標(biāo)儀是食品安全實(shí)驗(yàn)室應(yīng)對(duì)國(guó)標(biāo)檢測(cè)任務(wù)的理想選擇。

【五、參考文獻(xiàn)/相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)】

中華人民共和國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn), 編號(hào)為GB 3 1650 -兩千零一十九, 其名稱(chēng)是食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn): 有關(guān)食品之中獸藥殘留限度方面的標(biāo)準(zhǔn)。

食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn), 關(guān)于食品中真菌毒素限度的標(biāo)準(zhǔn), 是GB 2761 - 2017。

國(guó)標(biāo)/T五百零九點(diǎn)兒一九二杠兩千零三標(biāo)準(zhǔn)文本, 名為《動(dòng)物性 food那有里面所含有的物質(zhì)克倫特羅殘留量的測(cè)定》。

SN/T 4259 減 2015 之中的, 《出口食品里氯霉素殘留量的檢測(cè)辦法 酶聯(lián)免疫法》 , 就這樣表述且有標(biāo)點(diǎn)區(qū)分開(kāi)來(lái)。

中國(guó)藥典2020年版 通則0931 《酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法》